Para empezar, utilice una línea transgénica que exprese GFP y nitro reductasa, o NTR, bajo un promotor específico del fotorreceptor de bastones. NTR convierte el profármaco metronidazol, o MTZ, en un agente citotóxico para la ablación selectiva de bastones que expresan NTR. Para el monitoreo de GFP, use una cuchara para atrapar suavemente un renacuajo anestesiado y colóquelo con cuidado sobre un pañuelo húmedo dentro de una pequeña placa de Petri.
Observe la fluorescencia de GFP bajo un microscopio estereoscópico fluorescente y capture imágenes fotográficas de los ojos. Sumerja con cuidado la placa de Petri con el renacuajo en un tanque grande con agua de cría hasta que se despierte por completo. Para el monitoreo individual de la degeneración de la retina, coloque cada renacuajo en un recipiente pequeño que contenga 30 mililitros de MTZ de 10 milimolares o hermanos transgénicos en la solución de control.
Para el tratamiento por lotes, coloque los renacuajos transgénicos en un recipiente más grande con un litro de MTZ o solución de control. Levante los renacuajos durante una semana a 20 grados centígrados en la oscuridad para evitar la degradación de la MTZ. Después de siete días, observe el GFP bajo el microscopio estereoscópico fluorescente y capture imágenes fotográficas del ojo.
Una disminución en la intensidad de la fluorescencia, o incluso una ausencia virtual de fluorescencia, indica la degradación de los bastones. Los ojos de renacuajos transgénicos tratados con MTZ mostraron una disminución en la fluorescencia de GFP en comparación con los controles, lo que se confirma aún más en secciones de retina mediante inmunotinción de GFP.
