Use una red de inmersión para capturar renacuajos de sus tanques y transfiéralos a una solución de 50 mililitros de benzocaína al 0,005%. Permita que permanezcan en la solución hasta que ya no respondan a los estímulos. Use una cuchara para levantar suavemente un renacuajo y colóquelo con el lado dorsal hacia arriba en una pequeña placa de Petri que contenga un pañuelo húmedo.
A continuación, coloque la muestra bajo el microscopio estereoscópico. Para comenzar, tome un capilar afilado, use una punta de microcargador para cargar 10 microlitros de solución de cloruro de cobalto. Luego, coloque el capilar lleno en el manipulador de microinyectores para romper la punta capilar y ajustar el volumen de eyección a unos 30 nanolitros.
Usando el microinyector y un microscopio estereoscópico, inserte el capilar lleno de cloruro de cobalto sobre la lente en el ojo. Al llegar al interior del ojo con la punta capilar, expulsa dos gotas de unos 30 nanolitros por ojo. Después de inyectar el ojo derecho, gire la placa de Petri en un ángulo de 180 grados para inyectar el ojo izquierdo.
Transfiera la placa de Petri que contiene el renacuajo inyectado a un tanque grande que contenga un litro de agua de cría. Sigue observando a los renacuajos hasta que se hayan despertado por completo. La inyección de cloruro de cobalto de 10 milimolares condujo a la muerte celular específica de los fotorreceptores de conos, mientras que 25 milimolares condujo a la muerte celular amplia de la retina.
La tinción inmunológica reveló la ausencia de conos en las retinas inyectadas con cloruro de cobalto de 10 milimolares, mientras que los bastones se conservaron en gran medida. Después de las inyecciones de cloruro de cobalto de 25 milimolares, tanto los fotorreceptores como las células bipolares se vieron gravemente afectados.
