Para comenzar, coloque el dispositivo de tripa en un chip en un horno seco a 60 grados centígrados durante 30 minutos para eliminar la humedad. Luego, usando un generador de ozono UV, exponga el dispositivo a un tratamiento UV y de ozono durante 60 minutos. Asegure la tubería de entrada, derivación y salida del microcanal superior con clips de aglutinante.
Plante el tubo de entrada para el microcanal inferior, luego desconecte el tubo de salida para el microcanal inferior. Asegúrese de que el tubo de derivación del microcanal inferior permanezca abierto. Con una micropipeta P100, agregue 100 microlitros de una solución de polietilenia al 1% a través del orificio de salida del microcanal inferior.
Vuelva a conectar el tubo de salida del microcanal inferior. Asegure el tubo de derivación de entrada y salida del microcanal inferior, seguido del tubo de entrada para el microcanal superior con clips de aglutinante. Ahora desconecte el tubo de salida del microcanal superior, asegurándose de que el tubo de derivación permanezca abierto.
A continuación, agregue 100 microlitros de una solución de polietileno al 1% a través del orificio de salida del microcanal superior. Vuelva a conectar el tubo de salida del microcanal superior y deje que el dispositivo se incube a temperatura ambiente durante 10 minutos. Repita el procedimiento con glutaraldehído al 0,1% y luego con agua desionizada para eliminar cualquier exceso de solución de activación de la superficie.
Seque el chip durante la noche a 60 grados centígrados en un horno. Al día siguiente, retira el chip del horno y déjalo enfriar en una cabina de bioseguridad durante 10 minutos. Asegure la tubería de entrada, derivación y salida del microcanal superior, incluida la tubería de entrada del microcanal inferior con clips de unión.
Desconecte el tubo de salida del microcanal inferior. Agregue 20 microlitros de matriz extracelular, o mezcla de ECM, a través del orificio de salida del microcanal inferior. A continuación, vuelva a conectar el tubo de salida para el microcanal inferior.
Asegure el tubo de entrada, derivación y salida del microcanal inferior, incluido el tubo de entrada del microcanal superior con clips de unión. Después de desconectar el tubo de salida del microcanal superior, agregue 20 microlitros de mezcla VCM a través del orificio de salida del microcanal superior. Vuelva a conectar el tubo de salida del microcanal superior y luego retire el clip de aglutinante del tubo de salida del canal inferior, asegurándose de que ambos tubos de salida estén abiertos.
Coloque el chip en una incubadora de dióxido de carbono al 5% a 37 grados centígrados durante una hora.
