Preparing Cells to Assemble a 3D Human-Stem-Cell-Derived In Vitro Blood Brain Barrier

Comience por preparar las células endoteliales diferenciadas, los parásitos y los astrocitos para ensamblar el modelo iBBB. Después de aspirar el medio de cultivo celular de las células endoteliales diferenciadas, lavar las células con PBS una vez, luego agregar una mezcla de colagenasa proteasa a las células lavadas y disociar las células a 37 grados centígrados durante cinco minutos. Transfiera la mezcla de proteasa colagenasa con las células disociadas a un tubo cónico que contenga hECSR, manteniendo una proporción de 1:3 de la mezcla a hECSR, luego centrifugue las células a 300 G durante tres minutos y aspire el sobrenadante antes de resuspender el gránulo celular resultante en el hECSR.

Disociar los parásitos diferenciados con la mezcla de proteasa colagenasa a 37 grados centígrados durante cinco minutos. Agregue la cantidad adecuada de N2B27 en un tubo cónico y transfiera las células disociadas en la mezcla de proteasa colagenasa a él, manteniendo una proporción de 1:3 de la mezcla a N2B27. Gire las celdas a 300 G durante tres minutos.

Después de aspirar el sobrenadante, vuelva a suspender el gránulo de la célula en N2B27. Disociar los astrocitos diferenciados con la mezcla de proteasa colagenasa a 37 grados centígrados durante cinco minutos. Transfiera las células disociadas en la mezcla de proteasa colagenasa a un tubo cónico que contenga medio astrocito completo en una proporción de 1:3 de la mezcla con respecto al medio.

Después de centrifugar las células a 300 G durante tres minutos, aspirar el sobrenadante y resuspender el gránulo celular en medio astrocitario completo. Las celdas ya están listas para ensamblar el iBBB.