Cloning of Solute Carriers (SLCs) into pHTBV1.1 Bacmid for High-Throughput Protein Expression

Para empezar, añade 150 nanogramos de portador de soluto, o clon SLC, y 100 nanogramos del vector en una placa de 96 pocillos. Hacer el volumen de reacción a 8 microlitros con 10 milimolares de solución tris pH 8. Luego agregue 2 microlitros de mezcla de enzimas recombinantes e incube durante una hora a temperatura ambiente.

Después de la incubación, agregue 1 microlitro de proteinasa K e incube durante 30 minutos a 37 grados centígrados. Agregue 4 microlitros de mezcla de reacción a 50 microlitros de células E. coli Mach1 químicamente competentes y transforme las células utilizando el método de choque térmico. Después de la transformación, coloque la suspensión bacteriana en una placa de agar LB.

Identifique las colonias que albergan el vector pHTBV1.1 con el inserto del gen SLC utilizando cebadores apropiados y protocolos estándar para la PCR de colonias.