Para comenzar, inyecte un analgésico preventivo en un ratón anestesiado. Con una maquinilla, afeita la cabeza del ratón. Instale al animal en una mesa estereotáxica y coloque correctamente las barras de las orejas.
Coloque la boca del ratón en la pieza del ratón y coloque con cuidado la lengua hacia afuera para evitar la asfixia. Después de verificar la profundidad de la anestesia, coloque el soporte de elevación debajo del animal para asegurarse de que el cuerpo y la cabeza permanezcan nivelados horizontalmente. Y use una almohadilla tibia con papel para mantener la temperatura del animal.
Aplique ungüento en ambos ojos para prevenir la sequedad. Luego, usando yodo y alcohol, desinfecta la cabeza del ratón. Use un bisturí para hacer una incisión a lo largo de la línea media de la cabeza con el corte que se extiende desde detrás de los ojos para colocar la sutura lambda.
Exponga el cráneo y frote con una punta de algodón estéril saturada en una solución de cloruro de sodio al 0,9. Bajo un microscopio estereoscópico, identifique la vena rinal rostral o RRV y use un lápiz estéril para marcarla. Usando una aguja estéril como referencia, confirme la orientación del cerebro.
Asegúrese de que no haya cambios en las coordenadas DV y ML. A continuación, coloque una pipeta de vidrio estéril que contenga la solución del virus en la referencia RRV para la referencia anteroposterior cero. Avanzar la pipeta a lo largo de la sutura sagital hasta llegar a la coordenada anteroposterior elegida.
Marque este punto con un lápiz estéril y levante la aguja. Taladre con cuidado un pequeño círculo alrededor de la posición marcada para evitar romper el seno sagital superior y retire la pieza del cráneo con pequeñas pinzas. A continuación, utilizando el seno sagital superior mediano como referencia mediolateral, mover la pipeta a la posición y bajarla hasta que toque la duramadre como referencia dorsoventral.
Cree una ligera rotura en la duramadre y baje la pipeta a la posición dorsoventral preferida. Inyecte la cantidad especificada de virus adenoasociados o vectores AAV en el cerebro y retire la pipeta. Libere el ratón de las barras de las orejas, luego cierre la piel con clips quirúrgicos.
Pasa el animal a una jaula separada calentada para que se recupere. Esté atento a la recuperación del ratón. Una vez que recupere la conciencia, devuélvalo a su recinto original cuando esté completamente recuperado.
