Para comenzar, cubra una aguja de mariposa y su tubo con una solución de EDTA al 1% de potasio. Corta el tubo justo detrás de la aguja para recoger la sangre gota a gota. Coloque una rata anestesiada en el marco estereotáxico mientras mantiene la anestesia a través de una máscara facial.
Coloque una almohadilla térmica debajo del animal, manteniendo una parte de su cola en contacto directo con la almohadilla. Mueva a los animales hacia atrás de modo que miren hacia los lados y la vena lateral de la cola sea visible en la parte superior. Sumerge la cola en agua tibia para dilatar la vena lateral.
A continuación, limpie la cola con etanol al 70%. Ponga una luz cálida en la cola con una bombilla incandescente normal. Inserte la aguja de mariposa 21G en la vena lateral de la cola en un ángulo de 20 grados a una profundidad de cinco milímetros.
A continuación, recoja sangre en un tubo de recolección al vacío de 500 microlitros que contenga cinco miligramos de EDTA de potasio como anticoagulante. Retire la aguja y detenga el flujo de sangre ejerciendo presión en el lugar de la punción. Regresa a la rata a su jaula de origen.
A continuación, invierta suavemente el tubo 10 veces para mezclar el anticoagulante en la sangre. Haz agujeros de 1,5 centímetros de profundidad en el hielo y coloca los tubos en ellos verticalmente. Dentro de una hora de la recolección, centrifugue la muestra de sangre en una centrífuga refrigerada para separar el plasma.
Luego aspire unos 200 microlitros de plasma, evitando la capa de glóbulos rojos y blancos. Coloque el plasma extraído en un microtubo estéril de 0,2 mililitros. Reserve cinco microlitros de la muestra para el control de calidad y almacene la muestra restante a menos 80 grados centígrados hasta el análisis.
La sangre se extrajo de las ratas en cinco puntos de tiempo utilizando diferentes métodos, como la técnica de vacío en el día 52, el ordeño de la cola en el día 55 y las técnicas de gota en los días 58 a 64. La calidad de las muestras de plasma evaluadas mediante espectrofotometría UV mostró que el plasma era de color rosa con un valor medio de absorbancia de 0,647 cuando se utilizó la técnica de vacío. Del mismo modo, la técnica de ordeño de cola dio como resultado un plasma de color rosado con una absorbancia media de 0,620.
Por el contrario, con el sistema de extracción de gotas habilitado por gravedad, se obtuvieron muestras de plasma claro con valores medios de absorbancia plasmática significativamente reducidos, lo que sugiere que este procedimiento es óptimo para obtener muestras de alta calidad para análisis.
