Dissociation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice

Para comenzar, disecciona el tejido del cerebro y la médula espinal y almacena la suspensión celular en hielo. A continuación, prepare un volumen adecuado de mezcla de enzimas-1 y 2. Transfiera 1.950 microlitros de mezcla enzimática-1 al tubo C y agregue los trozos de tejido de la suspensión celular del SNC.

A continuación, añada 30 microlitros de mezcla de enzimas-2 al tubo C. Cierre bien los tubos C y fíjelos boca abajo en el manguito del disociador de celdas con calentadores. Ejecute el programa apropiado y observe durante al menos cinco minutos para asegurarse de que todos los tubos giren a la misma velocidad.

Mientras tanto, coloque un colador de 70 micras en un tubo de 50 mililitros y humedezca previamente el colador con dos mililitros de DPBS. Una vez finalizado el programa, separe los tubos C del disociador y centrifugue las muestras a 300 g durante un minuto a cuatro grados centígrados. Vuelva a suspender la muestra y aplíquela al colador previamente humedecido.

Agregue 10 mililitros de DPBS frío al tubo C vacío. Mezcle y agregue la suspensión en el colador correspondiente. Después de desechar los coladores, centrifugue la suspensión celular nuevamente durante 10 minutos y luego aspire cuidadosamente el sobrenadante para obtener un gránulo celular.