Isolation of CNS Cell Types Using Magnetic Beads in Naive and EAE Mice

Para comenzar, divida la suspensión de células del SNC de ratón purificada y sin diluir en dos fracciones para aislar aún más la microglía y los oligodendrocitos. A continuación, añada microesferas marcadas magnéticamente específicas para el antígeno de superficie para diferentes tipos de células del SNC a la suspensión celular respectiva. Coloque la columna en el campo magnético, iguale la columna y, a continuación, agregue la suspensión de celda resultante a la columna.

Las celdas etiquetadas magnéticamente se conservarán dentro de la columna y las celdas sin etiquetar se ejecutarán a través de ella. Después de retirar la columna del campo magnético, elimine las células marcadas magnéticamente de la columna en un tubo como la fracción de célula seleccionada positivamente. Divida el flujo negativo a través de los oligodendrocitos en dos fracciones para los aislamientos adicionales de neuronas y astrocitos.

El análisis de citometría de flujo utilizando marcadores específicos del tipo de célula combinado con la discriminación de células vivas o muertas produjo microglía, oligodendrocitos, astrocitos y neuronas. La caracterización fenotípica de las diferentes poblaciones celulares demostró que se obtuvieron suspensiones unicelulares con aproximadamente un 90% de pureza y viabilidad para todos los principales tipos de células residentes en el SNC.