Thawing and Transplantation of Cryopreserved Primordial Germ Cells for Drosophila Strain Revival

Para comenzar, alinee los embriones huéspedes de Drosophila miméticos de huevos en etapa cinco en un portaobjetos de vidrio para trasplantes. Mientras orienta su parte posterior hacia la derecha y ventral hacia arriba, alinee aproximadamente 30 embriones en dos filas en 20 minutos. Descongele las PGC criopreservadas en la aguja sumergiendo el soporte con la aguja apuntando hacia abajo en la solución EBR a temperatura ambiente.

Manténgalo sumergido durante 10 segundos. Coloque el portaobjetos de vidrio para trasplante en la platina del microscopio. Coloque la aguja congelada en el soporte capilar y coloque el primer embrión en la fila izquierda y la punta de la aguja en el mismo plano focal.

Con una lente de objetivo de 20x, coloque la punta de la aguja suavemente en la superficie del extremo posterior del embrión. Pinche suavemente el exterior de cada embrión y confirme que poco a poco vuelven a su forma original. Penetrar un embrión desde el polo posterior con la aguja.

Depositar suavemente aproximadamente de 10 a 20 PGC dentro del polo posterior, específicamente entre la membrana vitelina y la capa de células somáticas, y retraer la aguja del embrión antes de repetir lo mismo para embriones posteriores. Finalmente, para revivir la cepa, cruce hembras y machos recién emergidos.