Obtaining Wildtype and Transgenic Zebrafish Larvae and WildType Whole Larvae Dissociation

Comience por obtener los huevos de pez cebra silvestres y transgénicos de la configuración de cría respectiva. Tome una placa de Petri de 15 centímetros que contenga medio E3 o E3 tamponado con HEPES. Y recoja la cantidad adecuada de huevos fertilizados de la configuración de cría de pez cebra deseada. Incubar los huevos fertilizados en E3 a 28 grados centígrados con un ciclo de luz y oscuridad adecuado.

Un día después de la fertilización o dpf, retire los óvulos no fertilizados y deje que los fertilizados se desarrollen hasta cinco dpf. Seleccione las larvas transgénicas de pez cebra a un dpf. Antes de proceder a la disociación de larvas enteras, anestesiar las cinco larvas de tipo salvaje dpf con tricaína al 0,016% y transferir 30 larvas anestesiadas a una placa de Petri que contenga un mililitro de solución de tripsina-EDTA 10x.

Luego, con una cuchilla de afeitar, corte las larvas en trozos pequeños en la placa de Petri. Transfiera las larvas picadas a un tubo de microcentrífuga con dos mililitros de solución de tripsina-EDTA 10x y deje el tubo en hielo durante tres horas. Pipetear el contenido hacia arriba y hacia abajo con una pipeta P1000 cada hora para estimular la disociación.