Inyección intraganglionar de células B16F10-GP en el ganglio linfático inguinal de ratones

Comience aspirando 20 microlitros de suspensión de células de melanoma B16F10-GP con una jeringa de insulina de 100 U. Retire las burbujas de la jeringa. A continuación, en un ratón que se sometió a una cirugía de resección tumoral, inyecte la suspensión celular en un ganglio linfático inguinal.

Inserte la aguja desde el extremo distal del ganglio linfático y muévala lentamente hacia el centro del ganglio linfático. Observe una inflamación significativa de los ganglios linfáticos, lo que muestra que el líquido se inyecta con precisión. Inyecte un volumen igual de PBS en el ganglio linfático inguinal del otro lado.

Suturar la incisión con una sutura 3-0. Desinfecte la piel que rodea la herida con povidona yodada, luego coloque al ratón en una jaula limpia y mantenga el calor con luz infrarroja. Mantenga el ratón en la posición de decúbito lateral y vigile continuamente hasta que recupere la conciencia.

Después del implante con células B16F10-GP, se observó metástasis en los ganglios linfáticos mediante tinción de hematoxilina y eosina. En la etapa inicial, el ganglio linfático metastásico mostró una ocupación parcial por células tumorales con algunas áreas que aún contenían linfocitos no afectados. En la etapa tardía, el ganglio linfático metastásico se llenó de células tumorales acompañadas de angiogénesis tumoral.

Además, la frecuencia de linfocitos T CD8 positivos para antígenos específicos en sangre periférica fue del 2,81% en la etapa inicial, que se redujo al 1,48% en la etapa tardía. Curiosamente, mientras que el porcentaje de células T CD8 positivas se mantuvo estable en los ganglios linfáticos no metastásicos, se incrementó transitoriamente en el ganglio linfático metastásico en la etapa temprana, pero disminuyó drásticamente en la etapa tardía.