Microinyección de dsRNA en pupas de Trichogramma dendrolimi y seguimiento de los resultados del desarrollo

Para comenzar, encienda el extractor de agujas de vidrio, luego ajuste el calor a 280, la velocidad a 170, el retardo a 250 y el poste a 30. Biselar la punta de la aguja de vidrio capilar. Luego, usando una bomba de microinyección, cargue aproximadamente dos microlitros de solución de ARN bicatenario de homología de cadena pesada de ferritina en la aguja de inyección.

Transfiera la placa de agar que contiene las pupas de Trichogramma dendrolimi a la platina del microscopio compuesto. Inserte con cuidado la aguja de inyección en el abdomen de una pupa en un ángulo de aproximadamente 30 grados e inyecte gradualmente cinco nanolitros de solución de ARN bicatenario de homología de cadena pesada de ferritina. Incubar aproximadamente 700 pupas por tratamiento a 25 grados centígrados durante 24 o 48 horas.

Extraer el contenido de ARN de 100 pupas por réplica. A partir de aproximadamente 50 pupas por tratamiento, observe la emergencia de las avispas. Finalmente, registre la tasa de emergencia de avispas y la tasa de deformidad.

Las pupas de T. dendrolimi inyectadas con homología de cadena pesada de ferritina bicatenaria exhibieron una tasa de emergencia significativamente menor en comparación con las inyectadas con GFP bicatenario o sin inyección. En avispas emergidas, el 51,85% de las avispas T. dendrolimi sometidas a homología de cadena pesada de ferritina bicatenaria desarrollaron pequeñas alas deformadas. Esta deformación estuvo ausente en las avispas inyectadas con GFP bicatenario o en las que no recibieron ninguna inyección.

Además, las pupas de T. dendrolimi inyectadas con homología de cadena pesada de ferritina de doble cadena mostraron melanismo, indicativo de un metabolismo anormal del hierro. La melanina no se observó en avispas inyectadas con GFP bicatenario o en aquellas sin ninguna inyección.