Comience agregando 2.125 mililitros de gradiente de densidad isotónica a un tubo de polipropileno de 15 mililitros que contiene homogeneizado de cerebro murino. Rellene cada tubo con un búfer de fax hasta un volumen final de 8,5 mililitros. Invierta suavemente los tubos 20 veces para mezclar bien.
Con una pipeta de transferencia graduada estrecha, aplique suavemente cuatro mililitros de rosa con un gradiente de densidad del 37 % estableciendo dos capas limpias. Cambie las pipetas de transferencia y coloque una capa inferior de dos mililitros de azul, con un gradiente de densidad del 70 % por debajo de la capa del 37 %. Transfiera los tubos a una centrífuga enfriándolos a cuatro grados centígrados y gírelos a 500 G durante 20 minutos con la rampa de frenado ajustada al ajuste más bajo.
Después de la centrifugación, deseche la mielina de la parte superior del tubo de 15 mililitros con una pipeta de transferencia limpia. Recoja con cuidado el fragmento superior del gradiente de densidad en un tubo de polipropileno limpio de 15 mililitros con otra pipeta de transferencia. A continuación, reúna todas las células de la muestra haciendo circular lentamente la pipeta a lo largo de los lados del tubo mientras recoge el fragmento enriquecido con sistema inmunitario.
Transfiera el fragmento enriquecido con sistema inmunitario a un nuevo tubo de polipropileno de 15 mililitros. Lave la muestra añadiendo 10 mililitros de fax al tubo. Invierta suavemente el tubo 20 veces para mezclar bien.
Haga girar los tubos en una centrífuga enfriada con la rampa de frenado ajustada al ajuste más bajo para granular las células inmunitarias aisladas.
