Transfiera un gránulo inmune enriquecido con cerebro de ratón de un tubo de 15 mililitros a una placa de fondo redondo de 96 pocillos. Después de centrifugar la placa a 500 G durante cinco minutos, retire el sobrenadante agitando. Vuelva a suspender las células en 100 microlitros de tampón FACS, luego transfiera 10 microlitros de cada pocillo a los pocillos de control.
Centrifugar a 500 G durante cinco minutos. Después de eliminar el sobrenadante de las células centrifugadas, agregue 50 microlitros de bloque FC de doble concentración. Incubar durante 10 minutos en hielo.
Ahora agregue 50 microlitros de la mezcla maestra de anticuerpos al doble de la concentración final deseada e incorpórela en hielo en la oscuridad. A continuación, añada 200 microlitros del tampón FACS a cada pocillo y centrifugue a 500 G durante cinco minutos. Deseche el sobrenadante agitando y luego lave las células en 300 microlitros de tampón FACS.
Centrifugar y resuspender las células en 200 microlitros de tampón FACS. Finalmente, transfiera la suspensión a un tubo de clasificación de flujo que contenga 300 microlitros de tampón FACS.
