Analice el panel de anticuerpos, confirme que el citómetro tenga un mínimo de cuatro láseres, incluidos rojo, amarillo, azul y violeta. Establezca la matriz de compensación con perlas de compensación o controles de celda de tinción única. Para calibrar y estandarizar, ejecute perlas fluorescentes arcoíris al comienzo de cada experimento ajustando el voltaje del tubo fotomultiplicador hasta que los picos de perlas se alineen con los valores objetivo de los experimentos anteriores.
Ajuste el voltaje y la ganancia del tubo fotomultiplicador para el experimento. A continuación, utilice perlas de compensación capturadas con anticuerpos para establecer una matriz de compensación. A continuación, trace el área de dispersión lateral en el logaritmo frente a la altura de dispersión directa en lineal en un diagrama de puntos, cierre los escombros y seleccione el tamaño de la celda usando la puerta S1, elija celdas singlete en un diagrama de puntos un ancho de dispersión hacia adelante frente a la altura de dispersión hacia adelante con la puerta S2.
Para establecer puertas de piso cuatro, use el FMO relevante para cada canal de piso cuatro. Con histogramas de un solo parámetro, determine la señal positiva en cada canal y establezca las puertas en consecuencia. Registre cuidadosamente las muestras utilizando la estrategia de compuerta establecida.
Identifique la microglía utilizando la señal P2 RY 12 plus y determine la expresión de proteínas en el canal respectivo solo para la microglía. Establezca puertas de análisis en la interfaz de usuario del software de análisis de citómetros replicando la misma estrategia de compuerta utilizada durante el registro. Utilice la función de adición de estadísticas para seleccionar la mediana de la población de interés en la altura del canal compensado.
Exporte los valores de MFI para los canales respectivos a una hoja de cálculo utilizando el editor de tablas para un análisis estadístico adicional. El tratamiento con lipopolisacáridos indujo un aumento de la acetilación de la histona tres lisina 27. Cuando el MFI se normaliza dentro del sexo, el análisis del histograma de las células teñidas mostró poblaciones distribuidas normalmente con cambios celulares a un aumento de la fluorescencia.
Se observó un aumento similar en la acetilación de la histona tres lisina 27 en las células teñidas.
