Para comenzar el espectrómetro de masas, o la calibración de MS para LC-TIMS-TOF-MS/MS, abra el software de control TIMS y, en la subpestaña de calibración, haga clic en m/z, seleccione la mezcla de ajuste en Dropbox y haga clic en calibrar en la esquina inferior derecha. Continúe haciendo clic en calibrar hasta que se logre una puntuación de 100%. Ahora seleccione la pestaña de movilidad y siga los mismos pasos que se muestran hasta que se alcance la puntuación de calibración del 100%.
Para generar cada punto de calibración en la curva de calibración, agregue la mezcla estándar interna de lípidos con 10 microlitros de mezcla estándar interna deuterada. Prepare siete de estas muestras con picos para siete puntos de calibración en el rango deseado. Utilizando el software de análisis de datos, anote manualmente las cadenas de ácidos grasos en función de los patrones pasivos de MS/MS.
Para determinar el marcaje de isótopos estables, o la eficiencia de SIL, calcule la relación entre el área de los isótopos que contienen SIL y el área de los isótopos que no contienen SIL. Calcule el patrón teórico determinando la probabilidad de encontrar un átomo marcado en cualquier sitio. Calcule el enriquecimiento de SIL ajustando los perfiles de isótopos experimentales con el patrón teórico simulado en el software de análisis de datos.
Para iniciar el funcionamiento, active el horno de columna haciendo clic en el botón del termómetro y active las bombas haciendo clic en el botón de la válvula. Establezca el método MS en el método apropiado guardado anteriormente. Verifique que el volumen de inyección sea de cinco microlitros, y alinee el vial de un objetivo de 20 a uno, y guarde la lista de muestras.
Inicie la secuencia y confirme que la inyección se ha realizado correctamente mediante el mensaje que indica inyectado, que se muestra en el sistema. Copie la línea uno y péguela a continuación para generar una nueva línea dos. Rellene la línea dos con muestras en función del experimento.
Asegúrese de que se utiliza la posición correcta en el muestreador automático. Si las fases móviles son frescas, primero realice una prueba de forma máxima con los estándares de mezcla de lípidos del fabricante, para compararla con los resultados anteriores. La mezcla de lípidos y los estándares se muestran en la pantalla.
Asegúrese de que las líneas nuevas tengan el método de separación correcto y no el método de preacondicionamiento utilizado en la línea uno. Asegúrese de que el método MS introducido es correcto. Compruebe que se ha cargado el método de procesamiento correcto y que la ejecución del proceso automatizado está habilitada.
Guarde la lista de muestras para asegurarse de que las muestras se analizan una vez finalizada la ejecución actual.
