Para comenzar, coloque un mouse anestesiado en la mesa de operaciones. Con tijeras y fórceps oftálmicos estériles, abra las cavidades torácica y abdominal. Esto expondrá el corazón y los intestinos.
Disecciona cuidadosamente las arterias mesentéricas y la aorta por separado. Enjuague las arterias mesentéricas con PBS y transfiéralas a una placa de Petri de 10 centímetros que contenga una solución de penicilina-estreptomicina-anfotericina B al 1%. Del mismo modo, enjuague la aorta y transfiérala a otra placa de Petri que contenga la misma solución.
Elimina rápidamente toda la grasa alrededor de la aorta y las arterias mesentéricas. Después de enjuagar dos veces, coloque las arterias bajo un microscopio estereoscópico en una campana de cultivo de tejidos. Haz con cuidado un corte longitudinal a lo largo de las arterias.
Luego, con pinzas finas, retire la capa externa de la aorta y la primera rama de las arterias mesentéricas. Coloque la capa exterior en una placa de Petri de 3,5 centímetros que contenga de 0,1 a 0,2 mililitros de medio de cultivo y córtela en trozos pequeños de aproximadamente un milímetro cúbico. Transfiera los trozos de tejido a un matraz T-25 recubierto de gelatina.
Coloque el matraz verticalmente en una incubadora a 37 grados centígrados con 5% de dióxido de carbono. Después de tres horas, agregue cinco mililitros de medio de crecimiento de alta glucosa DMEM al matraz para sumergir todos los bloques de tejido.
