Caracterizar las células madre CD34+ aisladas de la aorta murina y las arterias mesentéricas, realizar un cultivo de bloque tisular y obtener las células por separación magnética. Para detectar la célula endotelial en la expresión de marcadores de células de fibroblastos después de la diferenciación, observe las células con un aumento de 40x con excitaciones láser de 488 nanómetros. Después de tripsinizar las células, granularlas por centrifugación y volver a suspender en 100 microlitros de tampón de clasificación.
A continuación, incubarlos con anticuerpos monoclonales anti-ratón CD16/CD32 a cuatro grados centígrados durante cinco minutos. A continuación, añada dos microlitros de cada anticuerpo monoclonal deseado para la tinción inmunofluorescente y vuelva a incubar a 4 grados centígrados durante 10 minutos. Lave las células dos veces con un mililitro de tampón.
Después de centrifugar las células como se ha demostrado, retire el sobrenadante y vuelva a suspender las células en 300 microlitros de tampón. Transfiera las células a los tubos de flujo y colóquelas en una caja de hielo. Ejecute una citometría de flujo para comprobar el porcentaje de células diferenciadas.
La evaluación por citometría de flujo confirmó la alta pureza de las células madre aisladas de la pared vascular CD34+. La tinción inmunofluorescente celular mostró que las células madre CD34+ aisladas expresaban predominantemente marcadores de células madre, CD34, c-kit y Flk-1. La citometría de flujo también confirmó que las células madre CD34+ aisladas poseían la capacidad de diferenciarse en células endoteliales y fibroblastos in vitro.
