Para empezar, aísle las células madre residentes CD34 positivas para la pared vascular a partir de modelos murinos. Obtener células puras mediante clasificación de células activadas magnéticamente y caracterizarlas. Para detectar la señalización del calcio, obtenga un cubreobjetos presembrado con las células y lávelo una vez con PBS.
A continuación, incubar las células con Fura 2-AM y solución Tyrode durante 30 minutos en la oscuridad. Para eliminar el tinte, incube las células con la solución de Tyrode durante 10 minutos. A continuación, monte la cámara en la platina de un microscopio de fluorescencia invertida, abra la ventana principal y vaya al cuadro de diálogo de configuración de agarre y a la página de la cámara.
Presione el botón en vivo para la visualización de la imagen en vivo. Para adquirir imágenes, dibuje varias líneas a mano alzada para rodear las celdas con diferentes colores y predefinir las regiones de interés. La microscopía de fluorescencia demostró que la administración de ATP aumentó los niveles de calcio intracelular en las células madre CD34 positivas para la pared vascular aislada.
