Comience por mantener las células HEK293T y DMEM que contienen FBS, penicilina y estreptomicina inactivadas por calor en un matraz T75. Para el recuento de células, mezcle 20 microlitros de suspensión celular con 20 microlitros de solución de azul de tripano. Agregue 20 microlitros de suspensión celular mezclada con colorante a la cámara de recuento de células y cuente el número de células por mililitro.
Semillas HEK293T células y 10 mililitros de DMEM completo en una placa de Petri de cultivo celular de 10 centímetros. Incubar las células durante la noche en una incubadora de dióxido de carbono a 37 grados centígrados. Al día siguiente, retira el medio completo y sustitúyelo por nueve mililitros de medio sin suero DMEM.
Usando los compuestos dados de ensamblaje de partículas virales, prepare una mezcla de cotransfección. Agregue lentamente la mezcla a la placa de Petri e incube a 37 grados centígrados durante seis horas. Después de la incubación, reemplace el DMEM sin suero con un medio DMEM completo y continúe la incubación para la cotransfección durante un máximo de 48 horas.
A continuación, separe las células pipeteando repetidamente sobre la superficie de la monocapa y transfiera la suspensión a un tubo de 15 mililitros. Centrifugar la suspensión celular a 400 G durante cinco minutos. Recoge el sobrenadante y pásalo por un filtro de 0,22 micras.
Almacene el filtrado que contiene el pseudovirus Ha-CoV-2 a 80 grados centígrados.
