Registro de la imagen de microscopía de fluorescencia con la imagen de microscopía electrónica para microscopía óptica y electrónica correlativa

Para comenzar, abra el software de registro y busque EasyCLIMv0. Una vez encontrado, haga clic en EasyCLIMv0, haga clic en Imagen o Secuencia y seleccione Abrir para importar la imagen de microscopía electrónica y las imágenes compuestas de imágenes fluorescentes y de campo claro. En la interfaz de EasyCLIMv0, haga clic en 2D XYT para seleccionar el 2D o 3D no rígido como modo de alineación.

En la ventana EasyCLIMv0, haga clic en el cuadro desplegable a la derecha de la imagen seleccionada que se transformará y cambiará de tamaño, probablemente FM, para elegir tiff de color RGB compuesto, luego haga clic en el cuadro desplegable a la derecha de la imagen seleccionada que no se modificará, probablemente EM, para elegir tiff de seis imágenes. Haga clic en Iniciar para iniciar el proceso de registro. En la ventana de la imagen de microscopía electrónica de seis imágenes tiff, haga clic en una nanopartícula de oro para colocar 0.1 en ella.

En la ventana de imagen de microscopía de fluorescencia, tiff de color RGB compuesto. Haga clic en la nanopartícula de oro correspondiente para ponerle 0,1. A continuación, haga clic en Actualizar transformación para confirmar la alineación de las señales de fluorescencia y microscopía electrónica de las nanopartículas de oro y complete el registro haciendo clic en Detener.

Para exportar la pila de imágenes alineadas que contiene cuatro imágenes de canal, haga clic en la imagen superpuesta, seleccione Imagen o Secuencia y haga clic en Guardar como.Ahora abra ImageJ, haga clic en Archivo y seleccione Abrir para importar la imagen superpuesta. Vaya a Imagen, haga clic en Pilas y, a continuación, apile dos imágenes para separarlas en imágenes de cuatro canales. A continuación, seleccione Imagen y haga clic en Color, seguido de Fusionar canales para fusionar los tres canales en una imagen compuesta.

Para convertir la imagen compuesta en una imagen correlativa de microscopía óptica y electrónica, seleccione Imagen, seleccione Tipo y haga clic en Color RGB.