Para comenzar, elimine el PBS de los cerebros disecados de Drosophila mediante una breve centrifugación. A continuación, añadir 600 microlitros de tampón de lisis de ARN a la muestra y homogeneizar 10 veces con un mortero de plástico. Inspeccione el tubo bajo un microscopio estereoscópico para ver si hay una lisis completa.
Centrifugar a 1000 G durante 5 minutos a 4 grados centígrados para eliminar los restos de tejido. Transfiera el sobrenadante aclarado a un nuevo tubo de microcentrífuga. Aísle el ARN con un kit de micropreparación de ARN siguiendo las instrucciones del fabricante.
En el caso de las células S2, elimine el PBS y aísle el ARN. Determine la pureza y la cantidad de ARN midiendo la relación de densidad óptica a 260 y 280 nanómetros. Para preparar la muestra para la electroforesis, diluya la muestra de ARN a 40 nanogramos por microlitro y agregue el colorante de carga de ARN.
Calentar las muestras a 70 grados centígrados durante 5 minutos. En un gel de agarosa, cargue la escalera de ARN y las muestras. Realice la electroforesis en tampón MOPS a 100 voltios durante 60 minutos y visualice el gel en un transiluminador UV.
La visualización de ARN aislados de cerebros de larvas de Drosophila mediante electroforesis de agarosa mostró una sola banda de ARN en alrededor de 600 nucleótidos, lo que indica una preparación de ARN intacta.
