Para comenzar, mida y agregue los componentes multimedia necesarios a una botella de 1 litro. Ajuste el pH de acuerdo con el cultivo microbiano de interés y mezcle los componentes hasta homogeneizar agitando la botella. Calienta el líquido hasta que hierva en un microondas durante cinco o seis minutos, abriendo el microondas con frecuencia y agitando la botella suavemente con un guante resistente al calor.
A continuación, conecte una pipeta de vidrio estéril de 10 mililitros a un colector de gas nitrógeno instalado. Abra el colector para ventilar el oxígeno y permitir que el gas nitrógeno fluya. Coloque la punta de la pipeta en el líquido y ajuste el flujo de gas para que las burbujas sean moderadamente vigorosas.
Enjuague el líquido con nitrógeno hasta que la botella ya no esté demasiado caliente para tocarla. Mientras espera a que el frasco se enfríe, coloque 10 frascos de cultivo estériles de 100 mililitros. Una vez que el frasco de medios alcance un calor soportable, tire de la punta de la pipeta hacia arriba en el espacio de cabeza del frasco.
Agregue 0,125 gramos de bicarbonato de sodio y 0,3 gramos de sulfuro de sodio nonahidratado y espere hasta que la resazurina se vuelva incolora. Mientras espera que la resazurina cambie de color, conecte cánulas de metal a la configuración del colector de gas. Ajuste el flujo de nitrógeno a una tasa moderada y coloque las puntas de las cánulas en botellas de cultivo.
Una vez que la resazurina sea incolora, alícuota 50 mililitros de líquido en cada frasco de cultivo. Tape cada botella con un tapón de goma del mismo tamaño inmediatamente después de quitar las cánulas. A continuación, asegure el tapón con un sello de aluminio.
Coloque las botellas en un recipiente esterilizable en autoclave y llénelo con agua del grifo hasta que los niveles de agua coincidan con los de las botellas. Esterilizar las botellas en autoclave a 121 grados centígrados durante 30 minutos.
