Para preparar una placa de 24 pocillos recubierta de gelatina, agregue 200 microlitros de la solución de gelatina al 0,2% a cada pocillo. Agite suavemente el plato para esparcir uniformemente la solución y dejar que los pocillos se cubran a temperatura ambiente. Después de 15 minutos, con un aspirador de vacío, retire con cuidado los restos de gelatina de los pocillos.
Agregue 0,5 mililitros de medios NBIL recién preparados a cada pocillo. Y coloque la placa en una incubadora de cultivo de tejidos para precalentarla. Alícuota 30 mililitros de medios de lavado en un tubo cónico de 50 mililitros.
Aspire el medio de la placa de cultivo de tejidos de las células madre m- y agregue la cantidad requerida de medio de desprendimiento celular. Después de tres a cinco minutos, pipetee hacia arriba y hacia abajo de 15 a 20 veces con una pipeta P1, 000. Observa las células bajo un microscopio.
Para garantizar una suspensión de una sola celda, transfiera la suspensión de la celda a un tubo de 50 mililitros que contenga medios de lavado. Centrifugar la suspensión a 300 G durante cinco minutos a temperatura ambiente y aspirar los medios de lavado. Vuelva a suspender el gránulo en aproximadamente 300 microlitros de medios de lavado.
