Para empezar, alícuota 200 microlitros de medios NBIL en tubos de 1,5 mililitros. Agregue 26 microlitros de la mezcla de reactivos de transfección óptima a la mezcla óptima de ADN. Coloque los reactivos vigorosamente aproximadamente 10 veces.
Transfiera el volumen requerido de suspensiones de mPSC a los 200 microlitros de tubos NBIL. A continuación, añada lipofectamina 2000 y la mezcla de ADN a los tubos y mezcle bien pipeteando. Después de cinco minutos, centrifugar la mezcla a 300 G durante cinco minutos y retirar el sobrenadante, dejando aproximadamente 50 microlitros en el tubo.
Vuelva a suspender el gránulo en 100 microlitros de medios NBIL. Transfiera la suspensión celular a una placa de 24 pocillos recubierta de gelatina y coloque la placa en la incubadora. Transfiera el volumen requerido de suspensión de mPSC a la siembra de 25.000 células por pocillo de una placa de 24 pocillos recubierta de gelatina y coloque la placa en la incubadora.
Una hora antes de la transfección. Reemplace el medio de los pocillos con 0,5 mililitros de medio NBIL. Después de la incubación, gota a gota, agregue lipofectamina 2000 y mezcla de ADN a los pocillos.
Coloque la placa en la incubadora durante 48 horas.
