Tinción de halo-ligando de células para estudios de interacción de condensado de proteínas mediante imágenes de una sola molécula

1 Después de crear las líneas celulares2 que expresan la proteína HaloTag de interés y Halo-H2B, 3 prepare el reactivo de tinción del ligando halo 4 por separado para ambos. 5 Enjuague las células con dos mililitros de PBS. 6 Agregue el ligando de halo que contiene el medio 7 e incube a 37 grados centígrados 8 con 5% de dióxido de carbono durante una hora.

9 Después de retirar el medio de tinción, 10 enjuague las células cuatro veces con PBS 11 e incube con medios frescos desprovistos de ligandos de halo. 12 Después de cuatro de estos ciclos de incubación con enjuague, 13 transfiera el cubreobjetos con las celdas 14 a una cámara compatible con la etapa del microscopio 15 con pinzas estériles. 16 Agregue medios sin rojo de fenol a la cámara antes de tomar imágenes.