Para comenzar, tome retinas aisladas en un plato de 24 pocillos lleno de agua destilada doble. Luego, reemplace el agua doblemente destilada con 800 microlitros de solución de tripsina YL e incube a 37 grados centígrados con agitación suave o nula durante 4 horas y 15 minutos. Usando la pipeta de transferencia de vidrio sumergida en una solución de tripsina YL, transfiera la retina a una placa de Petri de 35 milímetros que contenga agua de doble destilación sin pelusa.
Para eliminar la capa nuclear externa, voltee la semiesfera de la retina hacia abajo y use un cepillo recto de un solo cabello para presionarla suavemente contra el fondo del plato. Emplea un cepillo de bucle para eliminar suavemente los fotorreceptores de la retina. A continuación, para extraer el vítreo, voltee la semiesfera de la retina hacia arriba.
Use pinzas curvas para agarrar el vítreo bajo un microscopio de disección. Con otra pinza curva, agarre el extremo del vítreo donde conecta el nervio óptico. Separe las dos pinzas entre sí para extraer y desechar el vítreo.
Luego, voltea la retina hacia abajo nuevamente y usa el cepillo recto para presionarla suavemente contra el fondo del plato. Después, utilice el cepillo de bucle para cepillar la vasculatura desde la cabeza del nervio óptico hacia la periferia para eliminar el tejido neural restante. Gire la retina lentamente con el cepillo recto y use el cepillo de bucle para eliminar todos los trozos pequeños de tejido neural hasta que la red vascular esté limpia.
Para montar la vasculatura de la retina, use el cepillo de bucle para voltear la semiesfera de la retina hacia arriba y empuje suavemente la vasculatura hacia abajo sobre el portaobjetos de vidrio. A continuación, utiliza el cabello para fijar la vasculatura abierta en el centro del portaobjetos. Cepille el vaso retiniano en forma de cuenco desde el nervio óptico hasta la periferia para montar la vasculatura de forma plana.
Repita el cepillado en todas las direcciones hasta que la vasculatura se adhiera completamente al portaobjetos.
