Injerto de organoide cerebral humano en membrana corioalantoidea embrionaria de pollo para modelado neurovascular

Para empezar, se obtienen organoides cerebrales a partir de células madre embrionarias H9 y se obtienen huevos de gallina recién fertilizados. El primer día, limpie la superficie de la cáscara de huevo con etanol al 70% y déjela secar. Coloque un vendaje adhesivo de papel quirúrgico encima del huevo.

Con una lámpara, determina la superficie más delgada de la cáscara de huevo en el extremo superior. Luego, con una aguja estéril, perfore suavemente la cáscara del huevo para crear un orificio en la cámara de aire sin molestar a la leva del pollito. Para proteger al embrión del ambiente externo, cubra el orificio de la cámara de aire con un nuevo vendaje e incube el huevo a 38 grados centígrados.

Al séptimo día, retire el vendaje y limpie la superficie de la cáscara de huevo con etanol al 70%. Luego coloque un vendaje nuevo y más grande que cubra la extensión. Perfore suavemente la cáscara del huevo para agrandar el agujero en una ventana de injerto de dos centímetros de diámetro.

Con unas pinzas, retire los bordes de la ventana de la cáscara de huevo y retire el vendaje para quitar el polvo restante y los trozos de cáscara de huevo. Con una punta estéril de calibre ancho, recoja el organoide en 50 microlitros de PBS y transfiéralo con cuidado a la leva opuesta a la ubicación del embrión. Agregue una gota de siete microlitros de gel de fósforo alrededor del organoide.

Selle la ventana con parafilm y fíjela a la carcasa con un vendaje adhesivo. Incubar el trasplante para la diferenciación de la CAM. Después de cinco días, retire el vendaje adhesivo.

Con unas tijeras y unas pinzas finas, amplíe la ventana para facilitar la recolección de la muestra. Fíjelo con paraformaldehído al 4% durante dos minutos y recoja una sección de 1,5 centímetros cuadrados de la leva que contiene el organoide. Para confirmar el éxito del injerto, realice la tinción con hematoxilina y eosina de cortes de tejido de 20 micrómetros de espesor de CAM con organoide.

La tinción con hematoxilina y eosina del tejido del injerto indicó que los organoides continuaron madurando junto a los vasos de leva sin ninguna evidencia de infiltración de vasos sanguíneos.