Tinción inmunohistoquímica fluorescente cíclica múltiple de secciones de tejido canceroso

Para comenzar, obtenga portaobjetos previamente preparados que contengan secciones de tejido canceroso. Prepare la mezcla de trabajo de anticuerpos primarios. Agregue el complejo de anticuerpos en la sección del portaobjetos e incube durante una hora a temperatura ambiente.

A continuación, lave el portaobjetos tres veces con 0,1 % de PBS durante cinco minutos. Prepare una mezcla de anticuerpos secundarios fluorescentes. Añádelo gota a gota en el portaobjetos e incuba a temperatura ambiente durante una hora.

A continuación, realice una segunda ronda de incubación primaria de anticuerpos a temperatura ambiente durante una hora. Lave el portaobjetos tres veces con 0.1% Tween PBS durante cinco minutos cada una. Y con un papel de filtro, retira el exceso de agua del perímetro del tejido.

Del mismo modo, realice una segunda ronda de incubación secundaria de anticuerpos y lave como se demostró anteriormente. Ahora, agregue el reactivo de permanganato de potasio al tejido. Después de un minuto, enjuáguelo con agua corriente durante cinco minutos.

Realizar la deshidratación con concentraciones crecientes de alcohol. Finalmente, agregue un DAPI para cubrir completamente la sección de tejido y coloque un cubreobjetos para obtener imágenes multiespectrales. Las imágenes de inmunofluorescencia múltiple indicaron la presencia de células CD tres positivas, CD ocho positivas y CD 20 positivas en el tejido de metástasis cerebrales de cáncer de pulmón.