Para comenzar, recoja gránulos fecales de ratones monocolonizados por Escherichia coli inoculados con fagos T4 en un tubo de microcentrífuga estéril prepesado. Registre el peso final del tubo y calcule el peso de la muestra restando el peso inicial del tubo. Añadir un mililitro de tampón SM estéril al tubo y al vórtice a máxima velocidad para homogeneizar los gránulos fecales.
Registre el volumen de tampón SM agregado a cada muestra para unidades formadoras de colonias o cálculos de UFC o PFU por gramo. Preparar una serie de ocho diluciones seriadas de 20 microlitros de cada muestra en tampón SM de 180 microlitros. Coloque cinco microlitros de cada dilución en una placa de agar LB que contenga E. coli o solo en placas de agar LB para determinar la concentración de fagos T4 y E. coli.
Deje que cada punto se seque antes de invertir las placas e incubar durante la noche a 37 grados centígrados. Al día siguiente, seleccione la dilución con tres a 30 placas contables por punto. Cuente y registre el número de placas y diluciones utilizadas.
Divida el número de placas por el volumen sembrado en cada punto para obtener PFU por microlitro. Multiplique esto por el factor de dilución y el volumen de tampón SM agregado a cada muestra para PFU por muestra. Finalmente, divida por el peso de la muestra para obtener PFU por gramo de muestra.
Los niveles de fago T4 y E. coli detectados en ratones, inyectados con dos por 10 a la sexta PFU de fagos T4 o un lisado de vehículo, demostraron la coexistencia del fago T4 y E. coli sin agotamiento de ninguna de las poblaciones durante cuatro semanas. Las dosis más bajas del fago T 4 no afectaron a la colonización en comparación con las dos de 10 a la sexta UFP y no se observó ningún efecto dependiente de la dosis sobre los niveles de E. coli.
