1 Comience colocando2 el frasco de centelleo de vidrio que contiene 3 el scBAT del ratón en PBS en el banco de trabajo. 4 Reemplace el PBS con 10 mililitros de paraformaldehído frío, 5 4%. 6 Coloque el vial en un nutator, 7 meciéndose a cuatro grados centígrados durante la noche 8 para fijar el scBAT.
9 Al día siguiente, reemplace la solución de paraformaldehído 10 con 10 a 15 mililitros de PBS. 11 Coloque el vial en un nutator 12 y muévalo durante 30 minutos a temperatura ambiente. 13 Reemplace el PBS con solución salina al 0,85% 14 y continúe meciendo durante otros 30 minutos.
15 A continuación, sustituya la solución salina por 10 mililitros 16 de solución salina al 70% de etanol y al 0,85%. 17 Guarde el frasco en un refrigerador de cuatro grados durante la noche 18 o hasta que esté listo para la inclusión en parafina. 19 Al día siguiente, retire la mezcla salina de etanol al 70% 20 del vial y agregue de 10 a 15 mililitros 21 de alcohol deshidratante al 95%.
22 Agite el frasco en un nutator a temperatura ambiente 23 durante una hora. 24 Después del segundo lavado, agregue de 10 a 15 mililitros 25 de alcohol 100% deshidratante 26 y continúe meciendo en un nutator durante una hora. 27 Para eliminar scBAT para su inclusión, agregue 10 mililitros de tolueno 28 al vial y continúe meciendo en un nutator 29 hasta que scBAT esté transparente.
30 A continuación, incruste el scBAT en cera de parafina. 31 Seccione el scBAT con un micrótomo 32 y proceda a la tinción de hematoxilina y eosina. 33 La tinción de hematoxilina y eosina confirmó 34 que la scBAT comprende estructuras tisulares características 35 del tejido adiposo marrón, 36 incluyendo numerosos adipocitos multiloculares pequeños 37 en ratones postnatales y adultos.
