Para comenzar, transfiera 44 mililitros de medio basal a un tubo de centrífuga de 50 mililitros. Agregue 5 mililitros de 10% FBS a los medios. A continuación, pipetee 0,5 mililitros de soluciones antibióticas de penicilina, estreptomicina y anfotericina B.
Centrifugar un vial que contenga una solución rápida de Dexstran a 1000 G durante 30 segundos a 20 grados Celsius. Añadir 175 microlitros de agua al vial para obtener una concentración final de 30 milimoles por litro. Agite el tubo durante 30 segundos a velocidad media hasta que el material se disuelva por completo.
Incubar el material disuelto en hielo durante cinco minutos. Centrifugar el tubo antes de volver a vortexizar su contenido. A continuación, coloque el tubo en hielo hasta que se siga utilizando.
A continuación, centrifuga el reticulante para concentrar el material. Pipetear 188 microlitros de agua en el vial de reticulante para lograr una concentración final de 20 milimoles por litro de grupos tiol. Agite la solución del reticulante hasta que se disuelva todo el material.
Centrifugar el tubo después de la incubación. Luego vórtice brevemente antes de colocarlo a temperatura ambiente hasta su nuevo uso. A continuación, prepare la suspensión de células madre derivadas del tejido adiposo para 10 microlitros de hidrogel como se indica en la tabla para crear una mezcla maestra.
Transfiera nueve microlitros de la mezcla maestra a un pocillo en una placa de tiras de 96 pocillos. Después de tres minutos, agregue un microlitro del reticulante degradable a la mezcla para solidificar el gel. Pipeta. 170 microlitros de medios de cultivo completos precalentados sobre los hidrogeles.
Reemplace el medio de cultivo después de la incubación.
