Para comenzar, configure el sistema de láser de diodo para la longitud de onda verde. Encienda los láseres y deje que se calienten durante el tiempo recomendado. Una vez que los láseres hayan alcanzado un estado estable y se hayan estabilizado, utilice un medidor de potencia láser para medir la potencia de salida de los láseres.
Registre los valores de potencia para cada longitud de onda. Después de reemplazar el medio completo, coloque la placa de pocillos que contiene células madre derivadas del tejido adiposo incrustadas en hidrogel debajo del sistema de láser de diodo, irradie los hidrogeles con el tiempo de irradiación láser calculado para la fluidez seleccionada en la longitud de onda elegida. Asegúrese de que cada grupo experimental tenga un control no irradiado.
Incubar las placas de cultivo a 37 grados centígrados bajo un 5% de suplementación de dióxido de carbono y un 85% de humedad. A continuación, diluya la solución de recuperación celular enzimática con PBS en una proporción de uno a 20 para preparar una solución de trabajo. Agregue 30 microlitros de la solución de trabajo a cada gel o pocillo que contenga las células que necesitan recuperación.
Mueva o agite suavemente la placa para permitir una distribución uniforme de la solución de recuperación. Incubar la placa con la solución de recuperación durante 45 minutos. Después de la incubación, retire con cuidado la placa de la incubadora, centrifugue las placas a 1, 409 G durante cinco minutos a 20 grados centígrados para granular las células.
A continuación, deseche con cuidado el sobrenadante sin alterar el gránulo de la celda. Pipetear 220 microlitros de PBS estéril en el gránulo. Asegure una mezcla completa para lograr una suspensión unicelular homogénea.
Las células madre derivadas del tejido adiposo conservaron una morfología redondeada 24 horas después de la siembra y la exposición a la fotobiomodulación. Las células se dispersaron por todo el gel como células individuales o en racimos similares a uvas. La morfología se mantuvo sin cambios después de 10 días en cultivo 3D.
