Análisis de la función mitocondrial en pequeñas colonias de Candida glabrata inducidas por fluconazol

Para empezar, coloque el cultivo de Candida glabrata y el medio YPD en una plataforma de trabajo. Ajuste la densidad óptica de la suspensión de células de levadura a 600 nanómetros a 0,1 con medio YPD. Transfiera un mililitro de la suspensión celular a un tubo de cinco mililitros.

Sumerja un hisopo de algodón estéril en la suspensión de células de levadura. Frote el algodón de un lado a otro en la placa de agar Mueller Hinton, girando dos veces a 60 grados. A continuación, frote el perímetro para obtener una cobertura uniforme.

Divida la placa en tres sectores iguales con un marcador. Esterilice las pinzas sobre una llama durante uno o dos segundos. Después de enfriar, coloque un disco en blanco en el centro de cada sector.

Agregue 12.5 microlitros de caldo de fluconazol a cada disco. Mezclar bien para evitar burbujas e incubar a 37 grados centígrados durante 20 a 24 horas. Al día siguiente, agregue 20 microlitros de cloruro de trifeniltetrazolio al 20% directamente en el centro de cada colonia.

Incuba la placa a 37 grados centígrados durante 30 a 40 minutos. Escanee la placa a 1200 ppp con un escáner óptico a todo color de 48 bits. El tratamiento con fluconazol induce eficazmente mutantes pequeños de C. glabrata.

Una zona circular clara sin crecimiento rodeó el disco de fluconazol en el cultivo T cero, lo que indica una menor resistencia a los fármacos en el hongo parental. En el cultivo T three, se formaron muchas colonias pequeñas cerca del disco, lo que sugiere resistencia a los medicamentos después de tres tratamientos repetidos de terapia fotodinámica.