Para comenzar, coloque un ratón anestesiado e intubado en posición de decúbito lateral derecho. Lleva ambas patas delanteras a la esquina superior izquierda y las patas traseras a las esquinas inferiores. Desinfecte el tórax izquierdo con alcohol al 70% antes de la incisión.
Después de incidir y abrir la piel sobre el cuarto espacio intercostal, use una pluma de cauterización manual para coagular los vasos sanguíneos visibles dentro de las capas subcutáneas y musculares. Con las tijeras, divida los músculos dorsal ancho y serrato anterior a lo largo de la incisión cutánea. Eleva con cuidado la cuarta costilla con un par de pinzas curvas finas.
Haz un corte preciso justo por encima de la quinta costilla para entrar en el cuarto espacio intercostal. Cuando se pierde la presión negativa de la cavidad pleural y el pulmón se retrae de la pared torácica, se extiende la toracotomía anterior y posteriormente en el cuarto espacio intercostal. Aplique dos retractores de nervaduras para abrir el espacio de la nervadura, asegurándose de que haya una ventana de trabajo de al menos un centímetro cuadrado disponible para la visualización.
Utilice dos aplicadores puntiagudos sumergidos en algodón para elevar la cefala y movilizar el pulmón izquierdo. A continuación, divida sin rodeos el ligamento pulmonar inferior translúcido. Refleja el pulmón anteriormente para visualizar el hilio pulmonar posterior izquierdo.
A continuación, corta aproximadamente 10 centímetros de una corbata de seda 6-0 y coloca el punto medio de la corbata posterior al hilio. Ahora voltee el pulmón izquierdo hacia atrás sobre la atadura y tire de ambos extremos de la atadura hacia atrás. Sostenga una pinza curva para mosquitos en la mano dominante y un par de pinzas en la otra mano.
Sostenga un extremo libre A de la atadura con las pinzas y enrolle su punto medio sobre la pinza cerrada una vez. A continuación, agarre el punto medio del otro extremo libre B con la abrazadera y tire con ambas manos para sujetar el nudo corredizo. Después de atar el nudo, B debe tener un lazo desde el nudo, mientras que A debe estar recto.
Para confirmar la oclusión adecuada del bronquio, ocluya manualmente el tubo de salida desde el tubo endotraqueal hasta el ventilador. Esto no resultará en inflado del pulmón izquierdo. A continuación, cierre la incisión en la piel con uno o dos puntos interrumpidos simples hechos con una sutura de nailon 6-0.
Después del período requerido de isquemia, tire suavemente del extremo B de la corbata para liberar el nudo corredizo. Inicie inmediatamente el músculo de reperfusión y ocluya el tubo de salida del tubo endotraqueal al ventilador para volver a inflar el pulmón. Durante la reperfusión, cierre el espacio de la cuarta costilla con una sutura de nailon 6-0 de una sola puntada.
Coloque el ratón en posición supina de 15 a 20 minutos antes del final del tiempo de reperfusión. Asegure las cuatro extremidades con cinta adhesiva. Después de realizar una laparotomía de línea media, extienda la laparotomía de izquierda a derecha hasta la línea axilar siguiendo la curva de la costilla más inferior.
Desde el abdomen, se hace una incisión en el diafragma anterior para entrar en el tórax. A continuación, extienda la incisión hacia la izquierda y la derecha de la línea axilar anterior, a lo largo de la costilla inferior. Divida las costillas bilaterales a lo largo de la línea axilar anterior.
Extiéndalo hacia arriba para crear una toracotomía en forma de concha. Ahora refleja la pared torácica anterior hacia arriba para exponer el corazón y los pulmones bilaterales. A continuación, aplique una pinza en la pared torácica anterior para facilitar la retracción.
Use una pinza antimosquitos curva en la línea media para retraer el diafragma hacia abajo para una mejor visualización del pecho. A continuación, regrese el lóbulo accesorio que se extiende más allá de la línea media hacia el tórax izquierdo y de regreso al tórax derecho. Con la ayuda de un aplicador con punta de algodón y unas tijeras, divide el delgado ligamento que conecta el lóbulo con el tórax izquierdo, refleja todo el pulmón anteriormente.
A continuación, coloque otra corbata de seda 6-0 posterior al hilio derecho. Haz un nudo corredizo alrededor del hilio derecho mientras te aseguras de que los cuatro lóbulos del pulmón derecho estén rodeados. A continuación, cubra una aguja de media pulgada de calibre 31 en una jeringa de tuberculina de 1 cc con 200 microlitros de heparina.
Después de cuatro minutos de pinzamiento del hiliar derecho, extraiga la sangre arterial del ventrículo izquierdo y consúltela a la jeringa. Inclina la aguja hacia el cuello izquierdo. Pueden ser necesarias múltiples punciones para obtener suficiente sangre para la evaluación de la glucemia.
El pinzamiento hiliar izquierdo resultó en una disminución significativa de la presión parcial de oxígeno en el pulmón izquierdo en relación con la toracotomía simulada. La evaluación de la glucea arterial mostró que la mayoría de los neutrófilos eran intravasculares después del pinzamiento hiliar del pulmón izquierdo.
