Para empezar, obtenga el ratón eutanasiado administrado con los plásmidos adecuados. Para la preparación de la placa de cultivo, agregue 1,9 mililitros de medio de cultivo a una placa a base de vidrio y coloque con cuidado un inserto de cultivo celular sobre él. A continuación, añada 500 microlitros de medio de cultivo en el filtro y colóquelo sobre hielo.
Retire los embriones y colóquelos en una placa de Petri que contenga PBS helado. Bajo un microscopio, seleccione los embriones en función de la expresión de la proteína verde fluorescente u otros marcadores fluorescentes. Después de diseccionar el cerebro, colóquelo en gel de agarosa fundido tomado en un molde criogénico y gírelo varias veces.
Una vez que la agarosa se solidifique a temperatura ambiente, colóquela sobre hielo. Usando un micrótomo vibratorio, corte los sesos coronalmente hasta un grosor de 350 micrómetros y colóquelos en el filtro. A continuación, retire 600 microlitros de medio de cultivo tanto del interior como del exterior del vaso del filtro.
Después de cinco minutos, agregue 100 microlitros de medio de cultivo fresco al interior del inserto de cultivo celular. Para imágenes de lapso de tiempo, adquiera alrededor de imágenes de pila 10Z utilizando una lente 20X de larga distancia de trabajo. El análisis de imágenes de lapso de tiempo del cerebro de ratón proporcionó las trayectorias de las células migratorias positivas para EGFP y las células migratorias positivas para RFP de dos a 21 horas.
