Para empezar, inocular una sola colonia de OP50 en cinco mililitros de LB con ampicilina y anfotericina B e incubar durante aproximadamente seis horas a 37 grados centígrados en un agitador bacteriano. Una vez que el cultivo se vuelva turbio, diluya el cultivo de preinóculo de OP50 en 1 a 2.000 en 250 mililitros de TB con ampicilina y glicerol. A continuación, transfiera el cultivo líquido OP50 a un tubo de centrifugación estéril.
Centrifugar el tubo durante 15 minutos a 3,100 g en una centrífuga de mesa a cuatro grados centígrados. Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el pellet OP50 en agua estéril antes de volver a centrifugar. Después del segundo lavado, deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el pellet OP50 en agua estéril hasta un volumen de 50 mililitros.
Transfiéralo a un tubo cónico de 50 mililitros previamente pesado. Centrifugar el tubo durante 20 minutos para granular el OP50. Al final de la centrifugación, retire con cuidado todo el sobrenadante restante, asegurándose de que no quede agua en el tubo.
Calcule el peso del pellet restando el peso del tubo de centrifugación vacío del peso del tubo de centrifugación con el pellet. Vuelva a suspender completamente el pellet OP50 en tampón S-complete para lograr una concentración de 100 miligramos por mililitro. Pruebe la suspensión OP50 en una placa de agar para comprobar si hay contaminación.
Almacene la suspensión OP50 en un amortiguador S-complete a cuatro grados centígrados.
