Un mes después de la exposición a LISW, realizar un examen patológico de la cóclea del ratón. Iniciar hemoperfusión con solución de Ringer lactato, seguida de perfusión transcardíaca con paraformaldehído al 4%. Después de la decapitación del ratón, retire la cóclea y perfunde directamente con paraformaldehído al 4% a cuatro grados centígrados durante la noche.
Después de adquirir la imagen completa de la cóclea, utilizando el software ImageJ, calcule el mapa de frecuencia coclear para localizar con precisión las regiones cocleares específicas a diferentes frecuencias. Usando la fórmula dada, calcule la tasa de supervivencia de las células ciliadas en cada frecuencia. Después de adquirir imágenes de alta resolución de la pila Z de las células ciliadas internas, calcule el número de sinapsis.
Visualice las secciones de cóclea teñidas con hematoxilina y eosina y cuente el número de neuronas ganglionares espirales en el giro medio del canal de Rosenthal para calcular la supervivencia de las neuronas ganglionares espirales por control. En comparación con el control, la inmunotinción fluorescente mostró estructuras cocleares intactas sin pérdida significativa de células ciliadas o fibras nerviosas en todos los grupos. Sin embargo, las evaluaciones cuantitativas indicaron que la supervivencia de las células ciliadas externas fue significativamente menor en el grupo de 2,5 julios por centímetro cuadrado.
Mientras tanto, la supervivencia de las células ciliadas internas fue consistente entre los grupos. Los recuentos sinápticos se redujeron notablemente en los grupos de mayor frecuencia. Esto fue paralelo a una disminución en la densidad de neuronas ganglionares espirales en el grupo de 2,5 julios por centímetro cuadrado, lo que indica que la degeneración coclear depende de la exposición a la energía LISW.
