Después de anestesiar y quitar el pelo del ratón, colóquelo sobre una almohadilla térmica envuelta en una alfombra quirúrgica de autoclave. Endereza suavemente el cuerpo y levanta la piel a lo largo de la columna vertebral. Use un marcador quirúrgico para dibujar un solo punto en un lado del ratón en el centro de la piel de la carpa.
Después de cultivar el BXPC, tres líneas celulares de cáncer de páncreas humano durante dos semanas. Retire el matraz de la incubadora y colóquelo en el gabinete de seguridad biológica. Aspirar el medio y lavar las células con cinco mililitros de PBS.
Agregue cinco mililitros de agente de disociación celular en el matraz e incube a 37 grados centígrados con 5% de dióxido de carbono durante seis a siete minutos. Transfiera la suspensión celular a un tubo de 15 mililitros y centrifugue a 500 G durante cinco minutos. Después de eliminar el sobrenadante, vuelva a suspender las células en un medio de crecimiento completo.
Con un hemocitómetro, determine la concentración de células y el recuento total de células. Centrifugar 1,5 mililitros de suspensión que contiene 250.000 células por ratón para ser inoculado a 500 G durante cinco minutos. Después de retirar el sobrenadante, vuelva a suspender el pellet en 10 microlitros de PBS por ratón a inocular y coloque el tubo en hielo.
Con las puntas de pipeta frías, añada una membrana basal solubilizada en el tubo. Cargue la aguja de insulina enfriada de calibre 29 con 20 microlitros de la suspensión celular y coloque la jeringa en hielo. Inserte la aguja aproximadamente un centímetro en el punto de referencia del mouse y mueva la aguja debajo de la piel hasta que esté en el punto de referencia, con el lado biselado de la aguja hacia arriba.
Inyecte 20 microlitros de suspensión celular y espere 45 segundos antes de retirar la jeringa. Después de retirar al ratón de la anestesia, espere hasta que se vuelva ambulatorio antes de regresar a su jaula de origen.
