Para comenzar, coloque dos placas de 96 pocillos, un canal de carga y puntas de pipeta multicanal dentro de la campana de PCR. Después de etiquetar cada placa, gire la placa 1 180 grados para que los números de columna queden al revés mientras deja la placa 2 mirando hacia el técnico. A continuación, vierta el tubo de cinco mililitros de la mezcla maestra MM qPCR preparada en el canal de carga.
Utilice una punta de pipeta para asegurarse de que se transfiera toda la solución del tubo. Coloque las puntas en la pipeta multicanal, presionando en la base de cada punta para asegurar un sello hermético. Con el pipeteo inverso, dispense primero la mezcla maestra en todas las columnas pares o en todas las impares, alternando entre las dos placas.
Después de vórtice y centrifugar las tiras de PCR, colóquelas en la rejilla de tubos en el orden en que se colocarán en las placas. Ahora gire ambas placas 180 grados para que los números de las columnas se inviertan en relación con el técnico. Utilice la pipeta multicanal para volver a suspender las soluciones en las tiras de PCR.
Con el pipeteo inverso, llene las tres primeras columnas de cada placa con la tira de PCR A, alternando entre columnas pares o impares como la colocación de la mezcla maestra. Con una pipeta de 200 microlitros ajustada a 90 microlitros, vuelva a suspender completamente el séptimo tubo de dilución estándar en la tira de PCR S y llene las columnas cuarta a sexta de las placas. Después de llenar los platos, golpéelos suavemente en la parte superior de la mesa para asegurarse de que el líquido de los pozos se asiente en el fondo.
A continuación, cubra la parte superior de las placas con películas de sellado, presionando todos los bordes de la película con las yemas de los dedos para garantizar un sellado hermético. Para mezclar el contenido de los platos, gírelos en la parte superior del capó durante 30 segundos. A continuación, coloque las placas selladas en la ruleta de placas durante dos minutos con las aberturas de los pocillos hacia el centro.
Ahora coloque las placas en el termociclador asegurándose de que los números de columna sean legibles. Limpie la parte superior de cada placa con un pañuelo limpio antes de cerrar la tapa del termociclador. A continuación, haga clic en el botón Iniciar ejecución en el software del termociclador para ambas máquinas.
Cuando se le solicite, escriba un título para los archivos de análisis, que se usarán para etiquetar y realizar un seguimiento de los datos de este experimento.
