Preparación de medios acondicionados con células meníngeas humanas (HMC) y recolección de líquido cefalorraquídeo para el cultivo de células tumorales circulantes

Para empezar, recubra previamente un matraz T175 con Poly-L-Lisina. Coloque el matraz en una incubadora a 37 grados centígrados durante una hora. Ahora utilice una pipeta serológica estéril para aspirar la solución de lisina.

Pipetear 30 mililitros de medio de cultivo meníngeo completo que contiene células meníngeas humanas en el matraz. Incubar las células a 37 grados centígrados bajo un 5% de suplementación con dióxido de carbono. Cuando las células alcancen aproximadamente el 75 % al 80 % de confluencia, recoja y guarde los medios cultivados con HMC en un tubo cónico de 50 mililitros.

A continuación, añada un medio de cultivo meníngeo completo al tubo en una proporción de uno a uno. Por último, pipetee los factores de crecimiento en el tubo para crear el medio acondicionado HMC. Para procesar el líquido cefalorraquídeo, primero colóquelo en un tubo cónico de 15 mililitros sobre hielo para enfriarlo.

Centrifugar el fluido en una centrífuga preenfriada a 257 G durante cinco minutos a cuatro grados centígrados. Pipetear el sobrenadante sin alterar la peleta de la célula y hacer alícuotas de él en diferentes tubos. Ahora agregue un mililitro de PBS a la celda pellet para resususpenderla.

Centrifugar las células a 1.500 g durante cinco minutos a cuatro grados centígrados. Aspire el sobrenadante PBS dejando unos 50 microlitros en el fondo del tubo. Realice un recuento de células con la suspensión celular antes de cultivar las células.

Varios factores de crecimiento fueron regulados al alza en los medios cultivados con células meníngeas humanas.