Cultivo in vitro y expansión de células tumorales circulantes (CTC) de líquido cefalorraquídeo (LCR) para el estudio de la enfermedad leptomeníngea

Para comenzar, centrifugar los cultivos descongelados de CSF-CTC criopreservados a 257 G durante cinco minutos a cuatro grados Celsius. Aspirar el sobrenadante con la pipeta. Agregue un mililitro de PBS para lavar el pellet de celda.

Aspire de nuevo el sobrenadante. A continuación, vuelva a suspender las células en 450 microlitros de medios acondicionados con HMC en tres pocillos separados de una placa de 96 pocillos. Pipetee 150 microlitros de la suspensión celular en tres pocillos diferentes de una placa de 96 pocillos.

Rellene los medios acondicionados por HMC con medios nuevos cada tres días. Cuando el cultivo celular alcanza el 90% de confluencia, transfiera las células tripsinizadas de un pocillo a un pocillo vacío en una placa de 24 pocillos. Durante el cultivo continuo de las células tumorales, seleccione los clones de las células que se transforman y expanden exponencialmente para una mayor experimentación.