Para empezar, identifique a los ratones hembra con inmunodeficiencia de NSG, con enfermedad leptomeníngea o LMD. Coloque un ratón anestesiado en la mesa quirúrgica. Coloque la nariz del ratón en un cono modificado en forma de L de un aparato estereotáctico, asegurándose de que las fosas nasales permanezcan sin obstrucciones.
Tirando de la piel suavemente hacia adelante a través de las superficies ventrales de ambos pabellón auricular, luego fíjela al cono de la nariz con cinta adhesiva. Guíe las puntas de las tijeras quirúrgicas hacia abajo desde el pabellón auricular a través del hueso occipital. Crea una pequeña incisión en la línea media de cinco a siete milímetros justo por encima de la concavidad palpada.
Con un par de pinzas de punta roma que tengan puntas de uno o dos milímetros, aplique presión suavemente sobre la cisterna magna. Introduce las puntas en posición cerrada y ábrelas mientras ejerces presión descendente sobre la duramadre. Continúe realizando una disección roma hasta que la membrana dural sea claramente discernible y los vasos sanguíneos asociados sean visibles dentro del área expuesta.
Ahora mantenga las pinzas abiertas para retraer la musculatura circundante. A continuación, coloque una aguja de calibre 27 a 29 en una jeringa de un mililitro. Inserte la jeringa debajo de la duramadre para visualizar el bisel.
Retraiga gradualmente el émbolo de la jeringa para recolectar la mayor cantidad posible de líquido cefalorraquídeo. Transfiera el fluido a un tubo de microcentrífuga. Colócalo inmediatamente sobre hielo.
Centrifugar la muestra a 257 g durante cinco minutos a cuatro grados centígrados. Después de aspirar el sobrenadante, pipetee 500 microlitros de PBS estéril en el pellet de la célula. Centrifugar el pellet a 257 g durante cinco minutos a temperatura ambiente.
Deseche el sobrenadante y, a continuación, transfiera el pellet a una placa de 96 pocillos que contenga medios acondicionados con HMC.
