Para empezar, obtenga una suspensión celular viva enriquecida derivada de iPSC en un tubo cónico y centrifugue a 460 g durante cinco minutos a cuatro grados centígrados. Después de desechar el sobrenadante, agregue 100 microlitros de tampón de lisis en frío 0.5X recién preparado. Con un P100, pipetea hacia arriba y hacia abajo 10 veces para mezclar las células e incubar el tubo en hielo durante tres minutos.
A continuación, agregue 500 microlitros de tampón de lavado enfriado al lisado, centrifugue el tubo y deseche el sobrenadante. Después de repetir el lavado, vuelva a suspender el pellet en 120 microlitros de tampón de núcleos diluidos refrigerados. Con un colador de celdas de 40 micrómetros, filtre la suspensión de celdas y agregue 0,4% de azul de tripán al filtrado.
Por último, evaluar la calidad de los núcleos aislados bajo un microscopio. Utilizando esta técnica, se aislaron núcleos de alta calidad de células progenitoras hematopoyéticas humanas derivadas de iPSC criopreservadas.
