Comience colocando al animal anestesiado en la plataforma quirúrgica. Aplique ungüento lubricante para los ojos de cada animal para evitar que la córnea se seque durante la cirugía. Desinfecte el sitio quirúrgico afeitado con tres rondas alternas de povidona yodada e isopropanol.
A continuación, coloque un rollo de papel toalla o un tubo de 1,5 centímetros de diámetro debajo del animal, justo rostral hasta las caderas. Cubra al animal con un paño fenestrado, centrando la fenestración sobre la columna lumbar para el acceso quirúrgico. Para verificar la profundidad de la anestesia en el animal, pellizque cada pata y observe la ausencia de cualquier respuesta de retirada.
Luego, con una hoja de bisturí número 11, haga una incisión en la piel de tres centímetros de largo a lo largo de la línea media desde las vértebras L2 hasta L6. Ahora inserte un par de tijeras quirúrgicas curvas estériles entre el músculo y la piel, y abra suavemente las puntas para separar la piel del músculo subyacente. Retire la fascia que cubre las apófisis espinosas de las vértebras L2 a L5.
Pipetee de 25 a 35 microlitros del vector AAV9 en la tapa de un tubo de microcentrífuga estéril. Extraiga todo el volumen del vector de la tapa en la jeringa de insulina. A continuación, identifique las apófisis espinosas L5 y L4 en el animal.
Coloque la aguja de la jeringa a la izquierda de la apófisis espinosa L5, alineándola con el extremo caudal de la apófisis. Avance la aguja de la jeringa hacia adelante unos ocho milímetros sobre la lámina L5 y luego debajo de la lámina L4 hasta la cisterna lumbar hasta que se haga contacto con el hueso. Presione el émbolo de la jeringa lentamente durante aproximadamente cinco segundos.
A continuación, retire lentamente la aguja del lugar de inserción. Usando una sutura 4-0 o grapas quirúrgicas, comience a cerrar la incisión en un extremo de la herida. Para evaluar el éxito de la inyección de tinte, después de sacrificar al animal, se realiza una incisión de cuatro centímetros de largo en el músculo paralelo a la columna vertebral a ambos lados de las apófisis espinosas.
Use pinzas de columna vertebral o tijeras para eliminar delicadamente el músculo entre las apófisis espinosas. Con un rongeur, extraiga las apófisis espinosas desde la L6 hasta la columna torácica inferior. Inserte la punta inferior del rongeur debajo de la lámina L5 y retire metódicamente el hueso que recubre la médula espinal sacándole varios bocados.
