Para preparar la microaguja de vidrio, coloque capilares de vidrio de borosilicato en el zócalo polar. Después de configurar los parámetros requeridos, presione el botón de extracción para generar la aguja. Luego, divida las células madre GFP positivas en un tubo.
Después de contar y peletizar, vuelva a suspenderlos a la concentración deseada. Transfiera la suspensión celular a un tubo de 1,5 mililitros y colóquelo en hielo para el trasplante. Con una micropipeta, cargue cuatro microlitros de suspensión celular en una microaguja de vidrio.
Inserte la aguja en el soporte designado en el microinyector y, con unas pinzas rectas, rompa la punta de la aguja. Ajuste la presión a 10 PSI. Con una pipeta Pasteur, aplique una gota de aceite mineral en un portaobjetos de vidrio calibrado y microinyecte la suspensión celular en la gota para anotar el diámetro para la calibración del volumen de inyección.
Después de ajustar el volumen correcto, microinyecte rápidamente la suspensión celular en la rebanada. Bajo el microscopio estereoscópico de fluorescencia, verifique la presencia de las células en las rodajas e incube a 37 grados Celsius con 5% de dióxido de carbono.
