Para empezar, obtenga rodajas organotípicas de ratón trasplantadas con células madre neuroepiteliales derivadas de la médula espinal humana, o células HSCNES. Retire el medio de la parte inferior de la membrana del inserto y lave las rodajas tres veces con PBS o DPBS precalentado de Dulbecco. A continuación, aspire el DPBS y reemplácelo con 1,5 mililitros de formaldehído al 4% precalentado.
Luego, agregue un mililitro de formaldehído al 4% en la parte superior de la membrana. Después de lavar tres veces con DPBS, usando un bisturí quirúrgico, corte circunferencialmente la membrana del inserto y sepárela con las rodajas del componente de plástico del inserto. Después de la tinción con inmunofluorescencia, aplique 200 microlitros de solución de montaje en un portaobjetos de vidrio limpio.
Utilizando pinzas rectas, levante y transfiera suavemente la membrana flotante del plato de 35 milímetros a un cubreobjetos. A continuación, transfiera la membrana al portaobjetos de vidrio preparado. Cubra la membrana en el portaobjetos de vidrio con un nuevo cubreobjetos que tenga 100 microlitros de solución de montaje.
Deje que se seque durante la noche bajo una cubierta química oscura antes de proceder a la obtención de imágenes confocal. Las células HSCNES trasplantadas en tejido de la médula espinal mostraron una expresión estable de GFP durante 30 días, lo que indica una buena supervivencia.
