Pulverización y homogeneización de muestras de tejido adiposo intermuscular humano congelado para el aislamiento de núcleos

Para comenzar, llene el recipiente con nitrógeno líquido, coloque morteros, micro cucharas, espátula, plumas de vidrio, mortero de acero inoxidable y bajador automático en la plataforma de trabajo. Enfríe previamente los vasos en un vaso de precipitados lleno de hielo. Llene los dos morteros que contienen el mortero y la espátula con nitrógeno líquido para enfriar los instrumentos.

Mientras tanto, agregue un mililitro de tampón de homogeneización a los vasos de vidrio. Llene ambos morteros con nitrógeno líquido y vierta los 50 miligramos de muestra de tejido adiposo intermuscular humano en uno de los morteros. Para la pulverización, presione suavemente el mortero sobre el trozo de papel para romperlo en pedazos pequeños.

Una vez que el tejido se pulveriza, todavía queda de un cuarto a la mitad de un mortero de nitrógeno líquido. Inclina el mortero recogiendo el tejido pulverizado en el labio del mortero. Una vez que el nitrógeno líquido se evapore, coloque el tejido pulverizado en los vasos que contienen tampón de homogeneización.

En el bajón automático. Mueva el vidrio hacia arriba y hacia abajo del mortero de acero inoxidable durante 10 golpes en la dirección de avance, seguidos de 10 golpes en la dirección inversa. Una vez que la solución esté turbia y libre de fragmentos de tejido visibles, transfiérala a un tubo de baja unión de 1,7 mililitros preenfriado en hielo.

Enjuague las plumas con 400 microlitros de tampón de homogeneización y transfiéralo a un tubo de baja fijación.