Protocolo de inóculo directo (DIP) para la identificación bacteriana mediante un sistema automatizado de identificación microbiana y pruebas de susceptibilidad antimicrobiana (aMIAST)

Para comenzar, frote el tabique de una botella de hemocultivo automatizada, con organismos gramnegativos monomórficos con alcohol isopropílico al 70% dentro de un gabinete de bioseguridad de clase 2A. Extraiga cinco mililitros de la mezcla de caldo de sangre en una jeringa estéril equipada con una aguja de calibre 21. A continuación, desinfecte el tabique de goma de un tubo separador de goma.

Transfiera la mezcla de caldo sanguíneo al tubo. Centrifugar la muestra a 160 g durante 10 minutos. Ahora, pipetee con cuidado el sobrenadante dentro de un gabinete de bioseguridad.

Transfiera el sobrenadante a un nuevo vial de extracción de sangre simple. Coloque el vial tapado en una centrífuga a 2000 G durante 10 minutos. Ahora, aspire el sobrenadante con una pipeta estéril.

A continuación, dispense tres mililitros de solución salina estéril en un tubo aMIAST con un frasco dispensador. Utilizando un asa de inoculación estéril, recoja la pastilla bacteriana del fondo del vial e inocule en el tubo aMIAST. Utilice solución salina estéril y un densitómetro para ajustar la turbidez de la suspensión entre 0,47 y 0,63.

A continuación, coloque una fijación capilar de la tarjeta de identificación gramnegativa aMIAST en el primer tubo. Coloque las tarjetas seleccionadas correctamente en el casete. Ahora, cargue el casete en su posición en la cámara de llenado con el código de barras de muestra hacia adentro.

Cierre la puerta y presione llenar en la pantalla de la interfaz de usuario. Cuando se complete el ciclo de llenado, la luz indicadora azul del sistema parpadeará. Ahora, transfiera el casete de la cámara de llenado a la cámara de carga.

Retire los residuos del casete cuando se complete la carga. Subcultive la suspensión restante en los tubos en agar CLED para comprobar la pureza de los aislados. Los resultados de siete frascos de hemocultivo positivos, identificados mediante el protocolo de inóculo directo, fueron discordantes hasta el nivel de la especie.

De los 105 gramos negativos de notificación obligatoria de RAST identificados por el protocolo de inóculo estándar, 98 se identificaron correctamente mediante el protocolo de inóculo directo. Entre los 99 gramos negativos no notificables por RAST, se identificó un gramnegativo notificable por RAST en cuatro frascos de hemocultivo positivos.